“分光光度法测定芦丁含量”测定方法的改进

'中国科技信息2014年第05期CHINASCIENCEANDTECHNOLOGYINFORMATIONMar．2o14推广技术“分光光度法测定芦丁含量’’测定方法的改进曹宏梅赖红伟赵文秀董树国陶然吉林医药学院，吉林吉林1；52015ImprovementofDeterminationmethodof‘‘SpectrophotometricDeterminationofRutinContent”CaoHongmei。LaiHongweiZhaoWenxiuDongShuguoTaoRan，，，JilinMedicalCollege，JilinJilin132015，China摘要本文针对高教版“分光光度法测定芦丁含量”实验中显色对比法的一些不足，提出了改进方法一～标准曲线法。通过测定方法的改进，弥补了原测定●方法的不足，达到了良好的实验效果。关键词曹宏梅分光光度法；芦丁；测定方法；显色对比法；标准曲线法；改进曹宏梅(1978-)．Abstract女，理学学士，实验Thispaperputforwardanimprovedmethod，thatisstandardcurvemethodinregardto师，副主任，主要从事高分子功能材thosedeficienciesinthecolorcontrastmethodof‘‘SpectrophotometricDetermination料及药物的化学振ofRutinContent’"experimentinhighereducationversion．Wemadeupfordeficiencies荡研究。oftheoriginalmeasuringmethodandachievedgoodexperimentalresultthroughtheimprovementofthedeterminationmethod．Keywordsspectrophotometricmethod；rutin；determinationmethod；colorcontrastmethod；standardcurvemethod；improvement中图分类号：G642．0文献标识码：ADOI：10．3969／j．issn。1001-8972．2014．05．065仪器分析实验中的“分光光度法测定芦丁含量”是医害。除此之外，实验所用的硝酸铝(AI(NO))具有助燃学院校临床输血、医学检验、预防医学、药学、临床药学性和刺激性，除对眼睛和皮肤有刺激之外，其粉尘对上呼和药物制剂等专业学生的必修实验之一。通过这一实验，吸道也有刺激，吸入人体后，可引起胸部不适和咳嗽】。首先要使学生掌握分光光度计的正确使用方法；其次要让学生学会用分光光度法测定芦丁含量的具体方法。2改进后的测定方法——标准曲线法1原测定方法的不足由于原测定方法存在上述不足之处，因此很有必要对测定芦丁含量的方法进行适当的改进。笔者所在的实验教教材中测定芦丁含量的具体方法是显色对比法。在学学团队经过大量的实验探究，寻找出了一种能够解决以上生进行具体实验的过程中，该方法存在以下两点问题：①问题的测定芦丁含量的新方法——标准曲线法。学时安排与实验耗时不匹配。笔者所在院校对此实验安排的学时为4学时，而利用显色对比法测定芦丁含量时，需2．1标准曲线法测定芦丁含量的实验原理要学生完成的实验步骤仅有一步，整个实验操作需耗时2．5学时左右，存在实验内容与学时安排不匹配的弊端；②所芦丁的化学结构式中有露，对紫外光区有吸用的试剂多且部分试剂有毒。显色对比法要用到0．3mg／收，其吸收波长为258nm。因而可以采用紫外分光光度法ml芦丁标准溶液、未知芦丁样品溶液、30％乙醇、5％亚测定其含量。硝酸钠、10％硝酸铝和4％氢氧化钠溶液。其中的亚硝酸钠2．2试剂与仪器(NaNO，)具有助燃性、致癌性和毒性，对环境和人体有2．2．1试剂一l93— 推广技术中国稍技信息2014年第。5期-CHINASCIENCEANDTECHNOLOGYINFORMATIONMar．20140．3mg／ml芦丁标准溶液、未知芦丁样品溶液、30％乙(2)标准曲线的绘制醇取5个10ml容量瓶，分别加入0．20、0．30、0．40、0．50、2．2．2仪器0．60ml0．3mg／ml芦丁标准溶液，用30％乙醇溶液稀释至T6新世纪紫外可见分光光度计、移液管架、lml吸量刻度，摇匀。在选定波长下，用lcm~L色皿，以30％乙醇管、洗耳球、10ml容量瓶、胶头滴管、烧杯。溶液为参比溶液，测量各个溶液的吸光度，绘制吸光度一2．2。3T6新世纪紫外可见分光光度计操作方法浓度曲线。改进前，此实验采用显色对比法测定芦丁含量，学生(3)未知芦丁样品溶液的测定使用可见分光光度计测定各溶液的吸光度值。改进后，测取3个lOml容量瓶，分别移取0．50ml未知芦丁样品溶定方法改为标准曲线法，需使用紫外可见分光光度计完成液，用30％乙醇溶液定容至刻度，摇匀，在选定波长F，整个测定过程，结合此实验改进后的测定内容，该仪器使用lcmLh色皿，以30％乙醇溶液为参比溶液，测量各个溶用时的具体操作方法为：液的吸光度。从标准曲线上求得未知芦丁样品溶液的原始①接通电源，启动计算机，打开仪器电源开关，点浓度的平均值[2]。击“UVWIN5紫外软件v5．0．5”，仪器进入初始化状态2．4注意事项(约3rain)。(1)为保证分光光度计干燥和测量的精度，一方面要②在主界面上点击“”，仪器进入光谱扫描状对其底部的干燥剂定期烘干，另一方面在仪器长期不用或态，再点击“”，设置扫描参数(包括波长范围、扫搬动后，应对其进行波长精度、稳定性和吸光度精度的检描速度、波长间隔等)，点击“确定”。查。③将参比溶液(空白)和被测样品溶液分别倒人吸收(2)拿取比色皿时，手不可接触透光面，要保持透光面池内，开样品室盖，将盛有参比溶液的吸收池插入吸收池光洁。架的第一个槽中(对准光路)，被测样品溶液插入第二个(3)使用与放置比色皿时，不可使透光面与硬物接触，槽中，盖上样品室盖。以免磨损。④点击“翩基《蟪”，出现“请插入空白样品”对话(4)不用毛刷洗涤比色皿，可用适当溶剂淋洗，必要时框，点击“确定”，进行基线校正。点击“”，将被测可用柔软无尘的布擦。样品溶液置于光路中。再点击“◎开始”，出现“请插入样(5)规范使用吸量管。品”对话框，点击“确定”，开始扫描。扫描完成后，出(6)重视实验结束后的收尾工作。现“提示：完成”对话框，点击“确定”。3实验结果⑤点击“姐”，进行峰值检出后，点击“函”，打测定方法试刘种类实验耗时测定效果印图谱。显色对比法芦、30％乙醇、5％NeuN0。、2lO％A1(NO)和4％Na0H．5学时良好⑥在主界面上点击“”，进入光度测量状态后，点，击“”，设置所需测量波长；点击“添加(A)”，点标准曲线法芦丁、30％乙醇3．7学时良好击“确定”。4结语⑦将参比溶液、标准样品溶液和被测样品溶液分别倒通过比较两种测定方法，发现标准曲线法在取得了与入吸收池内后，打开仪器样品室盖，将盛有参比溶液的吸显色对比法相同的测定效果的同时，还有以下优点：①所收池插入吸收池架的第一个槽中，标准样品溶液和被测用的化学试剂种类少，一方面可以减少实验教学经费的投样品溶液分别插入后面的槽中，盖上样品室盖后，点击入，另一方面可以减轻实验技术人员的准备工作量；②避“囟楱霉”，出现“请插入空白样品”对话框，点击“确开了有毒试剂亚硝酸钠和具有刺激性的硝酸铝的使用，彻定”，进行参比调零。底清除了这两种试剂对师生双方身体造成伤害的隐患；③⑧点击“”，将标准样品溶液置于光路中后，点击实验步骤有所增多，做到了实验需做内容的多少与学时安“◎拜枯”，出现“请插入样品”对话框，点击“确定”。排相匹配。测试完成后，出现“提示：完成”，点击“确定”，记录数据。⑨重复步骤⑧，测定被测样品溶液的吸光度(A)值，记录数据。2．3实验步骤(1)吸收曲线的绘制，测量波长的选择用吸量管吸取0．50ml0．3mg／ml芦丁标准溶液于10ml容量瓶中，用30％乙醇溶液定容至刻度。在紫外分光光度参考文献计上，选用1cmLL色皿，采用30％乙醇溶液为参比溶液，[1]董顺福，韩丽琴，赵文秀等．大学化学实验[MI．北京：高等在200—300nm问，以波长为横坐标，吸光度为纵坐标，教育出版社，2012：192-194．进行光谱扫描，绘制吸收曲线，选择吸收曲线的峰值波长[2】胡建平．分光光度法测定芦丁条件的研究[J】_中国酿造，为测量波长。2009(8)：143—146．一194—'