差示分光光度法测定复方银芪降脂胶囊黄酮含量

'第20卷,第6期光　谱　实　验　室Vol.20,No.62003年11月ChineseJournalofSpectroscopyLaboratoryNovember,2003差示分光光度法测定复方银芪降脂①胶囊黄酮含量②王欲天　张立伟(山西大学分子科学研究所　太原市　030006)摘　　要　　以芦丁为观测指标,442±(1)nm处的差示分光光度与浓度的关系建立复方银芪降脂胶囊主要药效成分黄酮类化合物的含量测定方法,以控制产品质量。对照品在5.944—19.208LgömL范围内,差示吸收值($A)与浓度呈良好线性关系(r=0.9984),回归方程为$A=0.0689+0.1130C,平均回收率为97.78%,RSD为1.41(n=5)。差示分光光度法具有操作简单、结果准确、重现性好等优点,可作为复方黄芪降脂胶囊生产质量控制检测方法。关键词　复方银芪降脂胶囊,黄酮类,差示分光光度法。中图分类号:O657.32　　　文献标识码:B　　　文章编号:100428138(2003)06209492031　前言复方银芪降脂胶囊主要由黄芪、银杏叶等中药材经科学提取制成的具有降血脂功能的药物,药理学研究表明,该药物可明显降低高血脂大鼠血液中的总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇和血清甘油三脂含量,提高高密度脂蛋白胆固醇含量以及高密度脂蛋白胆固醇与总胆固醇比值。从药物组成分[1]析,起药效功能的成分主要为其中的黄酮类化合物。为了更好地控制生产工艺及产品质量,本实验利用差示分光光度法对产品中黄酮类化合物含量测定进行了研究。2　仪器与试药2.1　仪器HP8453UV2Vis吸收光谱仪(美国惠普公司)。2.2　试药复方银芪降脂胶囊:本研究室制备;芦丁标准品:中国药品生物制品鉴定所;二氯氧锆:分析纯,北京刘李化工厂;甲醇:分析纯,北京化工厂。3　方法与结果3.1　溶液制备3.1.1　供试品溶液制备准确称取三批不同批号药物(A、B、C)各0.5g,分别用甲醇溶解,超声充分提取数次,过滤,滤①山西省教育厅资助项目②联系人,电话:(0351)7017754;E2mail:lwzhang@sxu.edu.cn作者简介:王欲天(1980—),男,山西省交城县人,2001级硕士研究生,从事中草药有效成分提取、分离研究。收稿日期:2003205221©1994-2007ChinaAcademicJournalElectronicPublishingHouse.Allrightsreserved.http://www.cnki.net 950光谱实验室第20卷液定容至100mL作为样品储备液。测定时,取储备液1.00mL,定容至10mL,作为供试品溶液。3.1.2　对照品溶液制备准确称取24.98mg芦丁标准品,甲醇溶解定容至100mL,制成0.2498mgömL溶液作为对照品溶液。[2]3.2　差示分光光度法3.2.1　测定波长的选择准确吸取芦丁标准品液0.50mL2份,一份用甲醇稀释定容至10mL作为参比液,一份加2%二氯氧锆的甲醇溶液1.50mL,再用甲醇定容至10mL,混匀静置1h后,于250—500nm波长范围内扫描测定,观察对照品络合前后吸光度的变化,可得在(442±1)nm处有较大的差示吸光度值(图1)。另取供试品液0.80mL2份,同上法操作,记录供试样品络合前后差示吸收光谱的变化(图2),可见对照品和供试样品溶液络合前后的差示吸收光谱基本一致,同样在(442±1)nm处有较大的差示吸光度值,故选择(442±1)nm作为测量波长。3.2.2　样品稳定性考查将配制好的样品在室温条件下,放置不同时间,在(442±1)nm测定络合前后的差示吸光度值,结果显示,在温度为25℃左右时,差示吸光度值可很快达到稳定,并在3h内保持不变。图1　芦丁差示吸收光谱图图2　样品差示吸收光谱图从曲线1至曲线7芦丁浓度逐渐增大1——样品吸收光谱;2——样品差示吸收光谱。3.2.3　校准曲线的制备准确吸取芦丁标准品液0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7mL各2份置于10mL容量瓶中,一份加甲醇稀释至刻度,摇匀,作为参比液;另一份加2%ZrOCl2·8H2O甲醇溶液1.50mL,再用甲醇定容至10mL,混匀后静置1h,分别在(442±1)nm处测定不同浓度溶液络合前后吸光度的差值($A)。以$A与芦丁对照品溶液浓度做回归处理,得回归方程$A=0.0689+0.1130C,线性相关系数r=0.9984,线性范围为:5.944—19.208LgömL。3.2.4　样品含量测定分别准确吸取已制好的3组待测样品1.5mL各2份,以下按“校准曲线的制备”项下从“置于10mL容量瓶中⋯”起操作,测定每份药物络合前后的差示吸光度值,各组待测样品平行测定3次,取平均值,然后用校准曲线方程计算各样品中黄酮类成分的含量,见表1。©1994-2007ChinaAcademicJournalElectronicPublishingHouse.Allrightsreserved.http://www.cnki.net 第6期王欲天等:差示分光光度法测定复方银芪降脂胶囊黄酮含量9513.2.5　加样回收率试验　　准确吸取6份已知浓度药液各1.50mL,置于表1　供试样品含量测定结果(n=3,%)10mL容量瓶中,1份加甲醇定容,另外5份分别加供试样品黄酮类成分的含量RSD入0.2mL芦丁标准品液,以及1.50mL2%ZrOCl2A1.2560.28B1.2121.43·8H2O甲醇溶液,甲醇定容后测定每份的差示吸光C1.2351.13度值,计算加样回收率为97.78%,RSD为1.41(n=5),见表2。表2　加样回收率样品12345平均值RSD回收率(%)99.3996.0497.1598.9797.3797.781.414　讨论(1)测定植物中总黄酮含量一般直接用紫外光谱法测定,此法操作简单,时间短,但干扰较强,[3]测定值往往偏高。这主要是由于叶类中草药中含有大量的叶绿素干扰测定,虽然有报道用石油醚处理样品可除去大量叶绿素,但由于中草药成分的复杂性,在黄酮类成分主要吸收范围内仍可能有其他成分产生吸收而干扰测定。(2)黄酮类化合物分子中有游离的32OH或52OH存在时,32OH、42羰基或52OH、42羰基均可以与ZrOCl2在醇溶液中形成稳定黄色锆络合物,并产生新的吸收。在本实验测定体系中,芦丁和样品在(442±1)nm波长下均无明显吸收,而体系中加入ZrOCl2后,在(442±1)nm波长下吸光度值有显著增强,所测得的络合前后的吸光度差值($A)与样品中黄酮类成分在一定浓度范围内呈线性关系,并且此时样品中共存的其他组分如叶绿素等由于在此波长下不发生吸收,对测定无影响。参考文献[1]刘玲玲,丁心若.银杏药用价值[J].中草药,1994,25(4):219.[2]覃洁萍,梁山丹,何翠薇.差示分光光度法测定广西瑶族藤茶中黄酮类成分的含量[J].中草药,2002,33(7):607.[3]何桂霞,何群,裴刚等.瑶族藤茶中总黄酮类成分的含量测定[J].湖南中医药导报,1999,5(12):30.DeterminationofFlavonoidsinAntihyperlipidemiaCapsuleofYinqibyDifferentialSpectrophotometryWANGYu2TianZHANGLi2Wei(InstituteofMolecularScience,ShanxiUniversity,Taiyuan030006,P.R.China)AbstractAmethodforthedeterminationofflavonoidsinantihyperlipidemiacapsuleofyinqi,andforqualitycontrolwasestablished,whichwasbasedondifferentialspectrophotometryatthewave2lengthof442(±1)nmwithlutinasstandardindex.Theregressionequation,intherangeofthecontrolconcentrationof5.944—19.208LgömL,is$A=0.1130C+0.0689withagoodlinearity(r=0.9984)betweentheabsorbanceandconcentration.Theaveragerecoveryrateis97.78%andRSDis1.41(n=5).Themethodissimple,reliable,easytooperateandsuitableforthequalitycontrolofChinesemedicinewithabetterreproducibility.KeywordsAntihyperlipidemiaCapsuleofYinqi,Flavonoids,DifferentialSpectropho2tometry.©1994-2007ChinaAcademicJournalElectronicPublishingHouse.Allrightsreserved.http://www.cnki.net'